·FOLR1(FOLR1-2.1)抗体检测试剂（免疫组织化学法）(JSZ2400018)

受理号：JSZ2400018

体外诊断试剂产品注册技术审评报告

产 品 中 文 名 称：FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂 （免疫组织化学法）

产品英文（原文）名称：VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RxDx Assay

                        产 品 管 理 类 别：第三类

                     申请人名称：文塔纳医疗系统公司

Ventana Medical Systems, Inc.

国家药品监督管理局  医疗器械技术审评中心

目  录

基本信息  3

一、申请人名称  3

二、申请人住所  3

三、生产地址  3

技术审评述  4

一、产品概述  4

二、临床前研究概述  5

三、临床评价概述   14

四、产品受益风险判定   17

综合评价意见  20

基本信息

一、申请人名称

文塔纳医疗系统公司 Ventana Medical Systems, Inc.

二、申请人住所

1910E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona, 85755 USA

三、生产地址

1910E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona, 85755 USA

技术审评概述

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

本试剂的主要组成成分是使用含有载体蛋白（牛血清白蛋 白和羊血清蛋白），Brij-35 和 0.10%  ProClin  300（防腐剂） 的 0.05 M  Tris-HCL 稀释的小鼠单克隆 FOLR1 抗体（抗体浓度约 为 5.6μg/mL）,  克隆号为 FOLR1-2.1，包装规格为 50 测试/盒， 每盒含有 5mL 试剂。

（二）产品预期用途

本产品用于定性检测经福尔马林固定石蜡包埋的上皮性卵  巢癌、输卵管癌或原发性腹膜癌组织样本中叶酸受体 α（FOLR1 ） 蛋白。该检测试剂能够辅助识别可接受 ELAHERE （索米妥昔  单抗）治疗的上皮性卵巢癌、输卵管癌或原发性腹膜癌患者。

（三）产品包装规格

50 测试/盒

（四）产品检验原理

FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学法）利 用小鼠单克隆一抗与福尔马林固定、石蜡包埋组织切片中的 FOLR1 蛋白结合。使用 DAB 染色液染色能够可视化地观察该特异性抗体。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

1.主要原材料的选择

本产品的主要原材料包括 FOLR1  小鼠单克隆抗体和载体 蛋白（牛血清白蛋白和羊血清蛋白），Brij-35 和 0.10%  ProClin 300（防腐剂） 的 0.05 M Tris-HCL 稀释液。FOLR1 小鼠单克隆 抗体由外购获得。申请人选择有资质的供应商，并结合原材料 特性，通过功能性试验，确定了原材料的质量要求，并检验合 格。

2.质控设置情况

对切片染色时还应对阳性组织质控进行染色，推荐使用正 常输卵管作为阳性质控，它用于监测试剂和仪器性能，不用于 辅助诊断结果。除了使用 FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免 疫组织化学法）染色外，还应当使用阴性质控试剂对第二张切 片进行染色。

（二）生产工艺及反应体系研究

申请人对工艺的研究包括工艺运行(pOQ)  和工艺性能 （pPQ）两方面。通过工艺运行研究，确定合适的混合时间，并 在此基础上进行工艺性能研究，结果符合接受标准。

以前期研究结果为建立依据， 申请人采用全因子实验设计 方法，对染色条件进行了优化，最终在 Benchmark ULTRA 平台 上确定了最佳的反应体系。

（三）分析性能评估

本产品的分析性能包括免疫反应性、分析灵敏度和特异性、 精密度研究。

1.免疫反应性研究：

申请人对 30 种正常人体组织进行免疫反应性研究，并对着 色位置及特点进行记录，每种组织类型均不少于 3 例。在检测 的组织类型中并没有观察到超出预期的结果，结果总结见下表。

表 1 正常组织免疫反应检测结果

申请人对 53 种相关良性、恶性病变组织（非正常组织）进 行免疫反应性研究，并对着色位置及染色特点进行记录。在检 测的肿瘤类型中没有观察到超出预期的结果，结果总结见下表

表 2 非正常组织免疫反应检测结果

                              2.分析灵敏度

申请人对 953 例上皮性卵巢癌（EOC）切除组织样本进行 检测，以 TC≥75%作为阳性判断值，在 28.75%（274/953）的病 例中观察到 FOLR1 阳性状态，在 71.25%（679/953）的病例中观察到 FOLR1  阴性状态，在 224 例样本中观察到 FOLR1  临 界状态。临界状态定义为 75%±10%肿瘤细胞（TC）染色。阳 性临界样本占 15.95%（ 152/953 ）， 阴性临界样本占 7.56% （72/953 ）。

3.分析特异性

申请人对具有不同 FOLR1 蛋白表达水平的 4 种细胞系全细 胞裂解液进行了免疫印迹（Western Blot）分析。结果表明这四 个细胞系中观察到的FOLR1 蛋白质的相对水平与通过IHC 染色 确定的 FOLR1 蛋白质表达水平以及 FOLR1 的 mRNA 表达水平 相关。未在任何全细胞裂解物中观察到非预期染色或背景染色。 申请人又进一步使用重组 FOLR1 、FOLR2  和 FOLR3  蛋白与 VENTANA FOLR1（FOLR1-2.1 ）抗体进行免疫印迹反应，结果 显示，VENTANA FOLR1（FOLR1-2.1 ）抗体在蛋白质印迹检测 中不与除 FOLR1 之外的其他 FOLR 家族成员发生交叉反应。

4.精密度

申请人完成了实验室内精密度研究，包括批间，批内/运行 内、日内、日间研究；阅片一致性研究，包括不同阅片员之间、 同一阅片者不同阅片时间研究；在实验室间精密度研究中，包 括不同实验室之间、不同阅片员间以及不同染色日间精密度研 究，该研究在3 个不同的实验室完成。

实验室内精密度研究：

实验室内精密度研究采用24 例上皮性卵巢癌（EOC）组织 病例，实验设计考虑到以下因素：三批 FOLR1 抗体试剂，三台 BenchMark ULTRA 染色仪，三批 DAB 染色液，三个非连续日， 一名病理学家以及两份重复样本。试验结果符合接受标准，结 果总结见下表：

表 3 中间精密度

阅片一致性研究：

阅片一致性研究使用了 100  份不同的 EOC  样本（ 50  份 FOLR1  阳性样本和 50  份 FOLR1   阴性样本），这些样本使用

FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学法）进行了 染色。在使用 FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化 学法）评分算法评价 EOC 组织的 FOLR1 状态之前，对样本进 行选择和随机化。三名阅片者（病理学家）参与了本研究。他 们对所有样本进行两次评分，两次阅片之间至少间隔两周。每 个病例有 6 个读数（3 个阅片者各读 2 次）。阅片者内、阅片者 间精密度研究结果总结见下表。

表 4 阅片者内和阅片者间精密度

外部重复性研究：

申请人在 3 家外部实验室采用随机盲法，使用了既往诊疗 过程中留存的上皮性卵巢癌（EOC）（包括原发性腹膜癌和原发 性输卵管癌）病理组织标本进行检测以确定外部重复性，计算 阳性一致率（PPA）、阴性一致率（NPA）和总一致率（OPA）。 结果显示，同一家实验室 3 名不同病理医师的阅片结果、同一 实验室相同病理医师的 3 次阅片结果、不同实验室间的检测结果的 PPA ，NPA 和 OPA 结果均＞ 85% ，符合接受标准。

（四）阳性判断值或参考区间研究

本产品的 阳 性 判 断 值 的 建 立 是 通 过 药 物 临 床 试 验 FORWARD  1(IMGN853-0403)研究数据及其分析完成的。在 FORWARD 1 研究中,确立了 FOLR1 膜染色的 TC≥75%为cut-off 值，并通过分析进一步建立了 TC≥75%膜染色强度水平为中度 和/或强这一阳性判断值。

基于这些分析结果，通过 III 期临床研究 SORAYA （全球 多中心 IMGN853-0417、中国人群拓展 IMGN853-301 ）对该阳 性判断值进行了验证。在该研究中，研究目的为确定索米妥昔 单抗在 FRα 高表达的 PROC 患者中的有效性，入组标准为患者 的肿瘤必须为 FRα  表达阳性(≥75%的活肿瘤细胞必须表现出 2  级（中）和/或 3 级（强）膜染色强度），主要研究终点为 ORR。 以上研究均达到主要研究终点，在生物标志物确定的FRα 高表 达 PROC 患者中， 索米妥昔单抗的治疗表现出具有临床意义的 有效性以及良好的安全性和耐受性，表明在该患者人群中获益 大于风险。

综合以上所有研究， 最终确定了该试剂的阳性判断值为 ≥75%的存活肿瘤细胞（TC），膜染色强度水平为中度和/或强。

（五）稳定性研究

申请人对本产品的实时稳定性、使用稳定性和运输稳定性 进行了系统的研究，确定了在各种条件下试剂的有效保存时间， 同时也对样本稳定性进行了研究。

实时稳定性:使用三批2℃~8℃保存的试剂盒，分别在第 0 天、第 20  个月和第 26  个月进行染色取出检测上皮性卵巢癌 （EOC）组织，结果符合接受标准。因此确定申报产品在 2 ～ 8℃ 条件下保存，有效期 24 个月。

使用稳定性：每个试剂瓶通过压力平衡过滤器与外部环境 连接，试剂瓶的喷嘴仅在滴液瞬间打开，其它时间均保持封闭 状态。由于试剂瓶的物理特性，该产品的开瓶稳定性与未开瓶 产品的稳定性相同，即 2～8℃保存，有效期 24  个月。使用一 个批次的试剂盒进行机载稳定性研究，将该试剂置于 37±2℃下 192 小时（ 8 天）后，该试剂检测结果仍符合接受标准。因此， 申报产品机载稳定性为 8 天(基于 37±2℃稳定性数据)。

运输稳定性：使用三批试剂进行运输稳定性研究，在 2-8℃、 33℃±3℃ , 18℃±3℃ 、-20℃±5℃ 、37±2℃和-25℃±5℃条件下 分别储存 192 小时后，返回至2-8℃进行储存，并使用上皮性卵 巢癌（EOC）组织进行染色，结果符合接受标准。

样本稳定性：对经 10%中性福尔马林固定、石蜡包埋的上 皮性卵巢癌组织切片在 5℃±3℃以及室温条件下进行了切片稳

定性研究。研究结果显示，经 10%中性福尔马林固定、石蜡包 埋的上皮性卵巢癌组织切片样本在 5℃±3℃以及室温条件下均 可保存 45 天，对检测结果无影响， 满足检测要求。

三、临床评价概述

针对试验体外诊断试剂检测性能提交了 FOLR1  检测结果 重现性研究资料，体外诊断试剂伴随诊断用途提供了同步开发 的 索 米 妥 昔 单 抗 的 全 球 多 中 心 的 III   期 药 物 临 床 研 究 IMGN853-0417  及其中国人群拓展研究 IMGN853-301  研究资 料。

（ 一）FOLR1  检测结果重现性研究

申请人在中国医学科学院北京协和医院、复旦大学附属肿 瘤医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院共 3 家临床机 构完成了临床试验，包括环比试验和阅片一致性研究。

环比试验入组样本 300 例，均为上皮性卵巢癌、输卵管癌、 原发性腹膜癌患者。基于环比试验符合方案集，各机构与参考 结果比较的平均阳性一致率为 99.3%（95%CI：98.4% ，100%）， 平均阴性一致率为 97.6%（95%CI：96.1%，98.9%）；各机构两 两比较的平均阳性一致率为 96.8%（95%CI：95.6%，97.9%）， 平均阴性一致率为 96.9%（95%CI：95.7%，98.0%）。

阅片一致性研究入组样本 300 例，三家机构分别入组 100例，均为上皮性卵巢癌、输卵管癌、原发性腹膜癌患者。结果 显示：与参考结果比较，机构内同一病理医师阅片一致性研究 的总一致率为 99.6%（95%CI：99.1%，99.9%）；机构内不同病 理医师阅片一致性研究的总一致率为 99.4%（95%CI：98.9% ， 99.9% ）； 不同机构间阅片一致性研究的总一致率为 98.6% （95%CI：97.7% ，99.2%），各机构分别与参考结果比较的阳性 一致率和阴性一致率均较好。两两比对研究显示，机构内同一 病理医师阅片一致性研究的平均总一致率为 99.1%（ 95%CI： 98.4%，99.7%）；机构内不同病理医师阅片一致性研究的平均总 一致率 98.9%（95%CI：98.1%，99.6%）；不同机构间阅片一致 性研究的平均总一致率 97.1%（95%CI：96.0%，98.1%），各机 构两两之间比较的阳性一致率和阴性一致率均较好。研究结果 表明产品检测结果重现性较好。

（二）伴随诊断意义能研究

体外诊断试剂的伴随诊断意义是通过同步开发的药物临床 试验进行确认，本产品作为药物临床试验 IMGN853-0417  和 IMGN853-301 入组人群的筛选试剂参与研究。

IMGN853-0417 是一项全球多中心的单臂Ⅲ期研究，旨在评 价索米妥昔单抗在 FRα 高表达的的贝伐珠单抗经治的铂类耐药 的上皮性卵巢癌、原发性腹膜癌或输卵管癌患者中的有效性和安全性。FRα 表达由 Ventana FOLR1  检测测定。共计 106 名患 者接受了索米妥昔单抗 6mg/kg（基于调整的理想体重），静脉 给药，每 3 周给药一次直到疾病进展或出现不可耐受的毒性。 给药后前 36 周内每 6  周进行肿瘤评估，之后每 12  周评估一次。 主要疗效指标是根据 RECIST  v1.1  研究者评估的客观缓解率 （ORR）和缓解持续时间（DOR）。

所有患者之前均接受过贝伐单抗治疗， 47%的患者之前接 受过 PARP  抑制剂治疗。通过 VENTANA FOLR1(FOLR1-2.1) RxDx Assay 确定肿瘤的FRα 表达为阳性。有效性结果如下：客 观缓解率为 31.7% (95%CI：22.9%, 41.6%)，其中完全缓解率为 4.8%，部分缓解率为 26.9%；缓解患者人数为 33， 中位缓解持 续时间为 6.9 (95%CI：5.6, 9.7)。

IMGN853-301  研究是一项多中心、开放性、Ⅲ期单臂试验 （在中国境内开展的 IMGN853-0417 试验的单臂桥接研究），评 估索米妥昔单抗在中国铂耐药的 FRα  阳性的上皮性卵巢癌，输 卵管癌或原发性腹膜癌患者的疗效和安全性。入组患者既往均 接受过贝伐珠单抗治疗且接受过 1  至 3 线的系统性治疗。FRα 表达状态是通过使用 Ventana FOLR1（FOLR1-2.1 ）检测方法在 中心实验室测定，FRα  表达阳性患者方可入选。本研究主要疗 效指标是独立影像评估委员会（BIRC）根据 RECIST v1.1  确定

的客观缓解率（ORR）。

所有患者既往接受过贝伐珠单抗治疗，77.1%患者既往接受 过 PARP  抑制剂治疗。有效性结果如下：客观缓解率为 35.3% (95%CI：19.75%, 53.51%)，其中完全缓解率为 2.9%，部分缓解 率为 32.4%。

以上药物临床试验资料可以支持该产品的伴随诊断临床意 义。

综上所述，该产品临床试验资料符合技术审评要求。

四、产品受益风险判定

经综合评价，本产品的受益和风险总结如下：

通过性能验证证明了本产品的分析性能，可支持其在临床 研究中的预期用途，保证其有效和安全使用。性能验证包括免 疫反应性、分析灵敏度和特异性、精密度、稳定性。FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学法） 的预期受益是 在临床应用中帮助识别适合接受 FOLR1  靶向治疗的上皮性卵 巢癌患者，包括原发性腹膜癌和原发性输卵管癌。

当按照其规定的预期用途使用时，器械将实现其预期临床 受益。产品受益超过其剩余风险。风险管理计划已得到适当实 施，并制定了获取生产和生产后信息的方法。

为保证用械安全，基于对主要剩余风险的规避，在说明中提示以下信息：

1.本产品用于检测经福尔马林固定石蜡包埋的卵巢上皮、输 卵管或原发性腹膜癌组织样本中叶酸受体 α（FOLR1 ）蛋白。 该检测试剂能够辅助识别可接受 ELAHERE（索米妥昔单抗） 治疗的卵巢上皮癌、输卵管癌或原发性腹膜癌患者。FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学法） 的检测结果应 由具有资质的病理学家结合组织学检查、相关临床信息和相应 的质控结果进行判读。该检测试剂预期用于体外诊断（IVD）。

2.警示及注意事项如下：

（ 1 ） 已在 BenchMark ULTRA 仪器上对 FOLR1 (FOLR1-2.1) 抗体检测试剂（免疫组织化学法）与 DAB  染色液结合使用进 行了优化，一抗孵育时间为 32 分钟。不符合规定的孵育时间和 温度可能会产生错误结果。

（2）任何与建议测试程序的偏差都可能使检测结果无效。 由与推荐测试程序存在偏差的用户负责验证修改情况。

（3 ）免疫组化分析是一种多步骤诊断过程，在合适试剂的 选择、组织选择，免疫组化玻片的固定、处理和制备以及染色 结果解释方面均需要专门培训。

（4）组织染色取决于染色前组织的处理以及加工。不适合 的固定、冷冻、解冻、洗涤、干燥、加热、切片或者其他组织

或体液污染均可能导致人为错误、抗体捕获或检测结果不正确。 固定以及包埋方法差异或者组织内部的固有不规则可能继而导 致结果不一致。

（5 ）患者组织应当在从组织块制备切片后 45 天内染色。在 室温或 5℃ ± 3℃下储存超过 45 天的切片可能会出现染色性能 下降。

综合评价意见

本申报项目属于优先审批项目。依据《医疗器械监督管理 条例》（国务院令第 739 号）、《体外诊断试剂注册与备案管理办 法》（国家市场监督管理总局令第 48  号）等相关医疗器械法规 与配套规章，经对申请人提交的注册申报资料进行系统评价， 申报产品符合安全性、有效性的要求，符合现有认知水平，建 议准予注册。

2025 年 1 月 2  日

附件：产品说明书

FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学法）

【产品名称】

通用名称：FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试 剂（免疫组织化学法）

英文名称：VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RxDx Assay

【包装规格】

50  测试/盒

【预期用途】

本产品用于定性检测经福尔马林固定石蜡包 埋的上皮性卵巢癌、输卵管癌或原发性腹膜 癌组织样本中叶酸受体 α（FOLR1）蛋白。该 检测试剂能够辅助识别可接受 ELAHERE（索 米妥昔单抗）治疗的上皮性卵巢癌、输卵管 癌或原发性腹膜癌患者。

FOLR1  (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组 织化学法）（VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RxDx Assay）是一种采用小鼠抗 FOLR1  单克 隆抗体（克隆 FOLR1-2.1）的定性免疫组织 化学检测法， 预期用于通过光学显微镜评估 福尔马林固定石蜡包埋的上皮性卵巢癌、输 卵管癌或原发性腹膜癌组织样本中叶酸受体 α（FOLR1）蛋白的含量。本检测试剂与 DAB 染色液配合使用，用于在 BenchMark ULTRA 全自动免疫组化染色系统上染色。

FOLR1  表达的临床临界值为≥75%的存活肿 瘤细胞（TC），膜染色强度水平为中度和/或 强。

FOLR1  (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组 织化学法）的检测结果应由具有资质的病理 学家结合组织学检查、相关临床信息和相应 的质控结果进行判读。

该检测试剂预期用于体外诊断（IVD）。

概要和说明

FOLR1  (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组 织化学法）采用针对重组蛋白产生的小鼠单 克隆杂交瘤抗体，该抗体从细胞培养上清液 获得并使用蛋白G纯化。FOLR1 (FOLR1-2.1) 抗体检测试剂（免疫组织化学法）显示细胞 质染色和膜染色。然而，仅评估膜染色用于 确定FOLR1状态。

【检测原理】

FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组 织化学法）利用小鼠单克隆一抗与福尔马林 固定、石蜡包埋组织切片中的 FOLR1 蛋白结 合。使用 DAB 染色液（OptiView DAB IHC   Detection Kit）能够可视性地观察该特异性抗 体。更多信息请参阅 DAB 染色液说明书。使 用光学显微镜对结果进行解释。

临床病例必须使用适当的组织质控品进行评 估。除了使用 FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测 试剂（免疫组织化学法）进行染色外，还应

当使用鼠单克隆阴性质控抗体(VENTANA Negative Control (Monoclonal))对第二张载玻 片进行染色。该载玻片的特异性染色结果必 须为阴性，才被视为可接受。

【主要组成成分】

FOLR1  (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组 织化学法）含有足够供 50 次检测用的试剂。 一支 5  mL VENTANA FOLR1  (FOLR1-2.1) RxDx Assay 分配器含有约 28 μg 小鼠单克隆 （FOLR1-2.1）抗体。

采用含有载体蛋白（牛血清白蛋白和羊血清  蛋白）、Brij-35 和 0.10% ProClin 300（防腐剂）

的 0.05 M Tris-HCL 稀释抗体。  特异性抗体浓度约为 5.6 μg/mL。

本产品尚未观察到已知的非特异性抗体反应 性。

FOLR1  (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组 织化学法）采用从细胞培养上清液获得的小 鼠单克隆抗体。

关于以下内容的详细说明，请参阅相应的 VENTANA  染色液说明书：方法原理、材料 和方法、分析用样本采集和制备、质量控制 程序、故障排除、结果解释和局限性。

需要但未提供的材料

未提供染色试剂，例如：VENTANA染色液， 以及阴性和阳性组织质控片等辅助组件。

说明书中列出的所有产品可能并非在所有地 区均可获得。请咨询当地支持代表。

染色可能需要以下试剂和材料，但未提供：

1.     推荐的质控组织

2.     带正电荷的显微镜载玻片

3.     鼠 单 克 隆 阴 性 质 控 抗 体 （ Negative Control  (Monoclonal) ，Ventana  Medical Systems, Inc.,  国械注进20243400049）

4.     干燥烘箱，其温度能够保持 60 °C ±5 °C

5.     条形码标签

6.     二甲苯（组织学级）

7.     乙醇或试剂酒精（组织学级）

       100 %溶液：未稀释的乙醇或试剂酒 精

      95 %溶液：将 95 份乙醇或试剂酒精 与 5 份去离子水混合

      80 %溶液：将 80 份乙醇或试剂酒精 与 20 份去离子水混合

8.     去离子水或蒸馏水

9.     DAB   染 色 液 （ OptiView   DAB   IHC Detection Kit ，Ventana Medical Systems, Inc.,  国械备 20151018）

10.   清洗液（EZ  Prep  Concentrate（10X）,

Ventana  Medical  Systems,  Inc.,   国械备 20151560）

11.   清 洗 液 （ Reaction   Buffer   Concentrate （10X），Ventana Medical Systems, Inc., 国械备 20160944）

12.   缓冲液（ULTRA    LCS （预稀释） ， Ventana  Medical  Systems,  Inc.,   国械备 20151711）

13.   免疫组化抗原修复缓冲液（ULTRA Cell Conditioning Solution（ULTRA CC1）， Ventana  Medical  Systems,  Inc.,   国械备 20151060）

14.   苏木素染色液（Hematoxylin II，Ventana   Medical Systems, Inc.,  国械备 20150245）

15.   返蓝染色液（Bluing  Reagent ，Ventana   Medical Systems, Inc.,  国械备 20150244）

16.   通用实验室设备

17.   永 久 封 固 剂 （ Permount   Fisher   货号 SP15-500 或等效产品）

18.   盖玻片（足以覆盖组织，例如 VWR 货号 48393-060）

19.   全自动封片机（例如 Tissue-Tek  SCA  自 动盖片机）

20.   光学显微镜

21.   吸水抹布

【储存条件及有效期】

实时稳定性：2~8℃保存，有效期 24 个月。

开瓶稳定性：2~8℃保存，有效期 24 个月。

机载稳定性：8 天

生产日期和失效日期：见标签。

收到后如果不使用，储存于 2-8 °C。切勿冷 冻。

为确保正确递送试剂和抗体稳定性，每次使 用后均应当把分配器盖帽盖上并即刻将分配 器直立放入冰箱内。

每一支抗体分配器均标注有效期。如果正确  储存，试剂可稳定至标签指示的有效期结束。 切勿使用过期试剂。

【适用仪器】

全 自 动 免 疫 组 化 染 色 系 统  BenchMark

ULTRA

【样本要求】

当与VENTANA 染色液和BenchMark ULTRA 仪器联合使用时，本一抗适用于常规处理的 福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织。推 荐使用 10%福尔马林中性缓冲液作为组织固 定剂，固定处理 12-72 小时。1

在检测的所有固定时间（1-72  小时）内，乙 醇-福尔马林-乙酸（AFA）、95%酒精和 Prefer

固定剂均使特定的 FOLR1 蛋白表达损失，因 此不推荐用于本检测。由于肿瘤细胞染色百 分比的可变性， 不推荐使用福尔马林锌或 Z-5。

切片应切成约 4 μm 厚，并封固在带正电荷的 载玻片上。载玻片应当立即染色，因为组织 切片的抗原性可能会随时间消退。请向您的 罗氏代表索取《推荐的载玻片存储和处理》 以获取更多信息。

患者组织应当在从组织块制备切片后 45 天内 染色。在室温（15-25℃) 或 5℃±3℃下储存 超过 45 天的切片可能会出现染色性能下降。 建议对未知样本同时进行阳性和阴性质控。

【检测方法】

VENTANA  一抗被开发用于在 BenchMark ULTRA 仪器上与 VENTANA 检测试剂盒和 辅助材料联合使用。

关于推荐的染色方案，请参阅表 1。

该抗体已针对特定孵育时间进行了优化，但 用户必须验证使用该试剂获得的结果。

可遵照仪器用户指南中的规程显示、打印和 编辑自动化程序的参数。有关免疫组织化学 染色程序更为详细的信息，请参阅相应的 VENTANA 染色液说明书。

关于正确使用该器械的更多详细信息，请参 阅相关的分配器说明书。

表 1.  BenchMark  ULTRA  仪器上 FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学 法）与 DAB  染色液（OptiView  DAB  IHC Detection Kit）联合使用的推荐染色方案。

阴性试剂质控品

除了使用 FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂 （免疫组织化学法）染色外，还应当使用适当的阴性质控试剂对第二张载玻片进行染色。

阳性和阴性组织质控品

最佳实验室实践是在与检测组织相同的载玻 片上包括阳性质控切片。这有助于识别将试 剂应用于载玻片的任何故障。弱阳性染色的 组织最适合用于质量控制。质控组织可同时 含有阳性和阴性染色成分，同时作为阳性和 阴性质控品。质控组织应为新鲜尸检、活检 或手术样本，应采用与检测切片相同的方法 尽快制备或固定。

已知阳性组织质控品应当仅适用于监测试剂 和仪器的性能，而不适用于辅助确定检测样 本的特定诊断结果。如果阳性组织质控品未 能显示阳性染色，则该检测样本的结果应视 为无效。

该抗体的阳性和阴性质控组织示以正常输卵 管为例。FOLR1 表达主要局限于正常输卵管 上皮细胞的管腔表面。正常输卵管组织中的 FOLR1 染色呈环状膜染色，而基质中不存在 染色。FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免 疫组织化学法）需要使用中等强度的环状染 色病例作为阳性运行质控品。

表 2.  正常输卵管阳性质控组织的评估。

* 注：在评估正常输卵管 FOLR1 染色的可接受性时， 不考虑第一层管腔细胞的顶端染色。

图 1 ：正常输卵管中的 FOLR1 染色强度 【检测结果的解释】

图 2 ： VENTANA FOLR1 (FOLR1-2.1) RxDx Assay 染色的卵巢癌组织

染色解释/预期结果

EOC （上 皮 性 卵 巢 癌 ） 组织中 FOLR1  (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学 法）的细胞染色模式为膜染色和细胞质染色， 染色强度范围不同；仅评估膜染色来确定 FOLR1 状态。膜染色模式可以是顶端或环状 （部分或完整）染色。将使用含有至少约 100  个存活肿瘤细胞的样本评估每种强度（阴性、 弱、中度、强）的肿瘤细胞染色百分比。仅 中度和强染色强度有助于使用评分方法确定 FOLR1  状态。如果≥  75%的存活肿瘤细胞 （TC）呈中度和/或强膜染色，则认为 EOC  组织病例的 FOLR1  呈阳性。每种强度下的 FOLR1 染色百分比由经过培训的病理学家确 定。EOC 组织必须根据表 3 中提供的 FOLR1  (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学 法）评分算法进行评估。关于其他说明和代 表性图像，请参阅判读指南。

表 3. FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免 疫组织化学法）评分算法。

*由其他病理学家重新阅片，进行 FOLR1 评分

为了降低%TC 接近阈值 75%（65%至 85%） 的病例中 FOLR1 结果的可变性，建议由第二 名病理学家重新阅片。病理学家得出的%TC 在 65-85%之间的病例结果应由一名或两名病 理学家独立裁定。患者最终的 FOLR1 阳性结 果应通过多数原则或病理学家之间的共识获 得。

【检测方法的局限性】

该抗体存在以下特殊局限性：

1.     已 在 BenchMark   ULTRA   仪 器 上 对 FOLR1  (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免 疫组织化学法）与 DAB 染色液结合使用 进行了优化，一抗孵育时间为 32 分钟。 不符合规定的孵育时间和温度可能会产 生错误结果。

2.     任何与建议测试程序的偏差都可能使检 测结果无效。如表 1  所示，由与推荐测 试程序存在偏差的用户负责验证修改情 况。

3.     免疫组化分析是一种多步骤诊断过程，在合适试剂的选择、组织选择，免疫组 化玻片的固定、处理和制备以及染色结 果解释方面均需要专门培训。

4.     组织染色取决于染色前组织的处理以及 加工。不适合的固定、冷冻、解冻、洗 涤、干燥、加热、切片或者其他组织或 体液污染均可能导致人为错误、抗体捕 获或检测结果不正确。固定以及包埋方 法差异或者组织内部的固有不规则可能 继而导致结果不一致。

5.     患者组织应当在从组织块制备切片后 45 天内染色。在室温或 5 °C ± 3 °C 下储存 超过45 天的切片可能会出现染色性能下 降。

载玻片应干燥并在室温下储存。 由于已知环 境因素会影响切片的抗原稳定性，因此当储 存超过 45 天时，实验室应当在其自身环境中 验证切片的稳定性。

并非每台仪器上均注册了所有检测法。如需 更多信息请联系当地罗氏代表。

【产品性能指标】 

分析性能

已执行灵敏度、特异性和精密度的染色检测， 结果如下。

灵敏度和特异性

在独特的 EOC  组织切片商业样本队列中， 28.75%（274/953）的病例呈 FOLR1  阳性。 在独特的 EOC  组织切片商业样本队列中， 71.25%（679/953）的病例呈 FOLR1  阴性。 此外，使用 FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试 剂（免疫组织化学法）对一系列肿瘤组织的 FOLR1 染色进行了评价。

表 4.  通过检测 FFPE 非肿瘤组织确定 FOLR1 FOLR1  (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组 织化学法）的特异性。

表 5.  通过检测 FFPE 肿瘤组织确定 FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学 法）的灵敏度。

精密度

在 三 项 精 密 度 研 究 中 评 价 了 FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学 法）在 BenchMark ULTRA 全自动免疫组化染 色系统上的精密度：中间精密度研究、阅片 者（病理学家）精密度研究以及实验室间和 阅片者间精密度（重现性）研究。

中间精密度

中间精密度研究中使用了 24  例不同的 EOC 组织病例（12  份 FOLR1  阳性样本和 12  份 FOLR1   阴 性 样 本 ）。 评 价 使 用 FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学 法）染色 EOC 的染色精密度研究设计包括：

三批 FOLR1 抗体

•      三台 BenchMark ULTRA 仪器

•      三个 OptiView  DAB  IHC  Detection Kits（检测试剂盒间）

•      三个非连续日

•      一名病理学家，两份重复样本

所有载玻片均采用盲法和随机化处理，然后 使用 VENTANA FOLR1  (FOLR1-2.1)  RxDx Assay 评分算法对 EOC 组织进行评价。每例 病例有 18 个结果，大多数 FOLR1 结果是根 据这 18 个结果而来的。计算每例病例 18 个 结果的%TC 中位数和%TC 范围。此外，还计 算阳性百分比（%TC  ≥ 75%，对于 FOLR1 治疗“合格”）结果。结果总结见下表。

表6.中间精密度研究中病例的%TC中位数和 范围

对24例病例%TC值的变异性进行了评价，并 计算了以下精密度：重复性（病理学家内）、 日间、抗体试剂盒间、染色液间、仪器间和 总体精密度。结果总结见下表。

表7.中间精密度研究中病例的精密度

此外，还对不同精密度进行了定性分析。结果总结见下表。

注：阳性符合率（PPA）、阴性符合率（NPA）、总体符合率（OPA）。

阅片者精密度研究

在FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学法）的阅片者精密度研究中，评价了EOC 组织阅片的阅片者内和阅片者间精密度。本研究使用了100份不同的EOC样本（50份FOLR1阳 性样本和50份FOLR1阴性样本），这些样本使用FOLR1 (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织 化学法）进行了染色。在使用FOLR1  (FOLR1-2.1)  抗体检测试剂（免疫组织化学法）评分算 法评价EOC组织的FOLR1状态之前，对样本进行选择和随机化。三名阅片者（病理学家）参 与了本研究。他们对所有样本进行两次评分，两次阅片之间至少间隔两周。每个病例有6个读 数（3个阅片者各读2次）。对100例病例%TC值的变异性进行了评价，并计算了以下精密度： 阅片者内、阅片者间和总体精密度。结果总结见下表。