PD-L1（JS311）抗体试剂（免疫组织化学 ）（CSZ2300185）

受理号：CSZ2300185

体外诊断试剂产品注册技术审评报告

产品中文名称：PD-L1（JS311）抗体试剂（免疫组织化学 法）

产品管理类别：第三类

申 请 人 名称： 迈杰转化医学研究（苏州）有限公司

国家药品监督管理局  医疗器械技术审评中心

目  录

基本信息 3

一、申请人名称 3

二、申请人住所 3

三、生产地址 3

技术审评概述 4

一、产品概述 4

二、临床前研究概述  5

三、临床评价概述 19

四、产品受益风险判定  21

综合评价意见 24

基本信息

一、申请人名称

迈杰转化医学研究（苏州）有限公司

二、申请人住所

苏州工业园区星湖街 218 号生物纳米园 B5 楼 901 室

三、生产地址

苏州工业园区星湖街 218 号生物纳米园 B5 楼 801 单元、

901 单元

技术审评概述

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

本试剂盒由即用型 PD-L1 兔单抗和同型对照试剂组成（见  下表），即用型 PD-L1 兔单抗的主要成分是使用抗体稀释液稀释  的兔抗人 PD-L1 单克隆抗体（抗体浓度约 0.6μg/mL），抗体类  型是 IgG，克隆号是 JS311。同型对照试剂的主要成分是使用抗  体稀释液稀释的兔抗人 IgG 单克隆抗体（抗体浓度约0.6μg/mL）， 抗体类型是 IgG。

（二）产品预期用途

本试剂盒用于体外定性检测经 10%中性福尔马林固定、石 蜡包埋（FFPE）的三阴性乳腺癌组织中的程序性死亡受体-配体 1（Programmed Death-Ligand 1，PD-L1 ）蛋白表达情况，辅助鉴

别可使用特瑞普利单抗注射液（Toripalimab Injection，拓益® ) 治疗的三阴性乳腺癌患者，用作拓益® 的伴随诊断。

（三）产品包装规格

15 测试/盒、30 测试/盒、50 测试/盒。

（四）产品检验原理

本产品是利用抗原抗体特异性结合的原理检测 PD-L1 蛋白 表达情况。产品中的即用型 PD-L1 兔单抗作为一抗，在染色过 程中特异性结合检测样本中的 PD-L1 蛋白，并形成抗原-抗体复 合物（抗原建议采用高 pH 值的 EDTA 抗原修复液进行高温热 修复），酶标记二抗与该复合物特异性结合，并通过酶促 DAB 显 色试剂显色，使得检测样本切片中相应抗原部位出现着色。封 片后，经光学显微镜观察，以此判断样本中 PD-L1 蛋白的表达 情况。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

1.  主要原材料的选择

本产品主要原材料包括兔抗人 PD-L1 单克隆抗体、兔抗人 IgG 单克隆抗体和抗体稀释液。兔抗人 PD-L1 单克隆抗体和兔 抗人 IgG 单克隆抗体为外购方式获得，抗体稀释液为申请人自 制，并通过免疫组化验证。申请人选择有资质的供应商提供的

原料，并结合原料的特性，通过功能性试验，确定原料供应商。 制定了各主要原材料质量要求并经检验合格。

2. 企业参考品和质控品设置情况

本产品企业参考品针对 PD-L1 染色评分和染色强度进行了 设置，包括阳性参考品和阴性参考品，其中阳性参考品用于产 品的符合性，批内重复性和批间重复性检测。阳性参考品包括 三阴性乳腺癌和其他乳腺癌 FFPE 组织样本，并涵盖不同的 PD- L1 染色评分和不同的染色强度。阴性参考品用于产品的符合性 检测，阴性参考品包括三阴性乳腺癌和其他乳腺癌 FFPE  组织 样本。

本产品于说明书中推荐了质量控制方案。同时提供了同型 对照试剂，确保染色过程的特异性。

（二）生产工艺及反应体系研究

申请人通过企业参考品试验确定最佳的生产工艺及反应体 系，包括：即用型 PD-L1 兔单抗、同型对照试剂的配液工序、 分装工序、组装工序等，同时对反应体系中的样本切片厚度、预 处理温度及时间、抗原修复温度及时间、一抗孵育温度及时间、 过氧化物酶灭活时间、二抗孵育时间、DAB 显色时间、苏木素 复染时间等进行研究，确定了最佳的反应体系。

（三）分析性能评估

本产品分析性能包括免疫反应性、分析灵敏度、分析特异性 和精密度研究。

1.免疫反应性

申请人对30种正常人体组织进行免疫反应性研究，对着色 位置及染色特点进行描述，每种组织类型均不少于3例。在检测 的细胞类型或者组织类型中没有观察到超出预期的结果，对于 正常组织中的PD-L1免疫组化表达，观察到的染色与文献报道一 致。结果总结见下表：

表 1 ：30 种正常人组织 PD-L1 免疫反应检测结果

申请人对 26 种相关良性、恶性病变组织（非正常组织）进 行免疫反应性研究，对着色位置及染色特点进行描述，每种组 织类型均不少于 3 例。在检测的细胞类型或者组织类型中没有 观察到超出预期的结果，对于非正常组织中的 PD-L1 免疫组化 表达，观察到的染色与文献报道一致。结果总结见下表：

表 2：26 种非正常人组织 PD-L1 免疫反应检测结果

2.分析灵敏度

申请人对 103 例三阴性乳腺癌（TNBC）组织样本进行检测，  结果显示其 PD-L1 综合阳性评分（Combined Positive Score，CPS ） 在 0~100。以 CPS≥1 作为阳性判断值，申报试剂 PD-L1（JS311 ）

抗体试剂（免疫组织化学法）的PD-L1 蛋白表达阳性率为 51.46% （53/103）。本产品在 8 例 CPS=1 的三阴性乳腺癌样本中进行灵 敏度评价，研究结果显示，所有样本均能准确检出，与预期结果 一致。

3.分析特异性

申请人使用不同 PD-L1 表达水平的细胞系进行特异性研究， 研究结果表明本产品的检测结果与细胞系的 PD-L1 蛋白表达水  平一致。

申请人使用包含人 PD-L1 和 PD-L2 蛋白的细胞裂解液进行 免疫印迹分析（Western Blot Analysis, WB）。研究结果表明本产 品能特异性识别 PD-L1 蛋白，不识别 PD-L2 蛋白。证明 PD-L1 单克隆抗体对人 PD-L1 蛋白具有特异性，与 PD-L2 蛋白无交叉 反应性。

申请人分别在无肽、无关的非特异性肽、以及包含抗体结合 表位的不同浓度的特异性肽的条件下孵育同一批抗体，结果显 示本产品能够被含抗体结合表位的特异性肽抑制，无肽和无关 的非特异性肽均能正常染色，研究结果表明本产品能够特异性 识别 PD-L1 蛋白。

4.精密度

申请人采用三批试剂盒进行了实验室内精密度研究（同一 场所），包括批间精密度、批内精密度、同一轮内精密度、日内 精密度、日间精密度、检测人员间精密度；阅片一致性研究，包 括不同阅片者之间、同一阅片者不同阅片时间之间；外部重复 性研究（三个外部场所），包括不同阅片者之间、不同实验室之 间、实验室内非连续日间；申请人对检测结果进行配对比较，确

定阳性一致率（PPA）、阴性一致率（NPA）和总体一致率（OA）， 采用 Wilson 评分方法计算双侧95%置信区间。研究结果表明本 产品的精密度良好，符合预期要求。

表 3  同一场所精密度

表 4  阅片一致性研究

表 5  外部重复性研究

（四）阳性判断值或参考区间研究

申请人采用 103 例三阴性乳腺癌组织样本，使用已上市的   PD-L1 检测试剂作为参考方法，通过受试者工作特征曲线（ROC） 和一致性比对的方法初步确立了本产品的阳性判断值为 PD-L1     综合阳性评分 CPS≥1。

申请人在 TORCHLIGHT 研究（NCT04085276）（一项多中 心、随机、双盲、安慰剂对照性 III 期研究， 旨在评估特瑞普利 单抗联合白蛋白紫杉醇对比安慰剂联合白蛋白紫杉醇在首诊 IV 期或复发/转移性三阴性乳腺癌患者的有效性和安全性）中，使 用确立的阳性判断值（综合阳性评分 CPS≥1 ）作为受试者分层 标准，以无进展生存期（PFS）为主要终点，比较了特瑞普利单 抗联合注射用紫杉醇（ 白蛋白结合型）与安慰剂联合注射用紫 杉醇（白蛋白结合型）对首诊 IV 期或复发转移性 TNBC 患者的 疗效。研究结果显示，特瑞普利单抗联合化疗对比安慰剂联合

化疗显著延长 PD-L1 阳性人群无进展生存期（PFS），达到临床 试验预设的主要终点。

综合以上研究，最终确定本产品的阳性判断值为 PD-L1 综 合阳性评分 CPS≥1。

（五）稳定性研究

申请人对本产品的实时稳定性、使用稳定性和运输稳定性 进行了系统的研究，确定了在各种条件下试剂的有效保存时间。 同时也对样本稳定性进行了研究。

实时稳定性：采用三批次试剂盒放置于 2℃~8℃条件下保 存，分别于第 0 个月，第6 个月，第9 个月，第 12 个月，第 13 个月，第 14 个月，第 15 个月，使用包含 PD-L1 蛋白表达不同 染色强度和不同染色评分的 TNBC 组织样本对试剂盒的性能进 行检测。结果显示，各项性能指标均符合要求。确定本产品在 2℃~8℃条件下保存，有效期 12 个月。

使用稳定性：将运输模拟结束后三批次试剂盒放置于 2℃~8℃ 条件下保存，保存期间进行 16 次开瓶/机载稳定性研究。进行开

瓶/机载稳定性研究时，将本研究的所有待测试剂盒转移至室温 下放置 6 小时，重复 16 次。研究显示，本产品每次上机使用不 超过 6 小时，上机次数不超过 16 次，每次使用后应立即密闭并 置于 2℃~8℃保存，禁止冷冻，有效期为 12 个月。本产品采用

一个批次的试剂盒进行了机载稳定性挑战试验，将试剂置于在 45℃条件下连续放置 14 天后，产品各项性能指标均符合要求。

运输稳定性：采用三批次试剂盒进行运输稳定性研究，使用 企业参考品对运输后及运输后放置到有效期末的试剂盒进行检 测，研究结果表明该产品在冷链运输的条件下运输 5 天后以及 在效期末的检测结果的各项性能指标均能够满足质量的要求。 试剂盒的运输时间在 5 天内不影响产品质量。

样本稳定性：对经 10%中性福尔马林固定、石蜡包埋的三

阴性乳腺癌组织切片在室温（ 10℃~30℃)、2℃~8℃、和-20℃±5℃ 条件下进行了切片稳定性。研究结果显示，经 10%中性福尔马

林固定 、 石蜡包埋的三阴性乳腺癌组织切片样本在室温 （ 10℃~30℃)保存 14 天，对检测结果无影响，满足检测要求， 在 2℃~8℃保存 2 个月，对检测结果无影响，满足检测要求，在 -20℃±5℃保存 6 个月，对检测结果无影响，满足检测要求。

三、临床评价概述

申请人针对试验体外诊断试剂检测性能提交了 PD-L1 检测 结果重现性研究资料，试验体外诊断试剂伴随诊断用途提供了 特瑞普利单抗注射液的同步开发的药物临床试验 JS001-026-III- TNBC 研究资料。

（ 一）PD-L1 检测结果重现性研究

申请人在中国医学科学院北京协和医院、复旦大学附属肿 瘤医院、浙江省肿瘤医院共 3 家临床机构完成了临床试验。包 括环比试验和阅片一致性评价试验。

环比试验入组样本 120 例，结果显示：与参考结果比较， 总一致率 95.7%（95%CI：93.6%，97.9%）；两两比对研究平均 总一致率 91.4%（95%CI：88.5%，94.3%）。

阅片一致性评价试验入组样本 180 例，三家机构各 60 例， 结果显示：与参考结果比较，机构内同一病理医师阅片重复性 总一致率 98.3%（ 95% CI：97.3%，99.4%），不同临床试验机 构间阅片总一致率 95.7%（95%CI：93.9%，97.4%），机构内不 同病理医师阅片重复性总一致率为 97.8%（ 95%CI：96.5% ， 99.0%）。两两比对研究显示，机构内同一病理医师阅片重复性 平均总一致率 96.7%（ 95% CI：95.2%，98.2%），机构内不同 病理医师阅片重复性平均总一致率为 95.6%（95%CI：93.8% ， 97.3%），不同临床试验机构间阅片总一致率 91.4%（ 95%CI： 88.9%，93.8%）。研究结果表明产品临床性能满足要求。

（二）伴随诊断性能研究

试验体外诊断试剂的伴随诊断意义通过同步开发的药物临 床试验进行确认，本产品作为药物临床试验（ JS001-026-III-  TNBC）入组人群的筛选试剂。JS001-026-III-TNBC 是一项随机、

双盲、安慰剂对照、多中心、 III 期临床研究，旨在评估特瑞普 利单抗联合白蛋白紫杉醇对比安慰剂联合白蛋白紫杉醇在首诊 IV 期或复发/转移性三阴性乳腺癌患者的有效性和安全性。入组 人群为经组织学确诊的首诊 IV  期或复发/转移性、且不适合手 术治疗的三阴性乳腺癌患者。

药物临床试验入组人群采用本产品进行筛选。研究共入组  531 例患者，其中 PD-L1 阳性人群（CPS≥1 ）入组 300 例，特瑞  普利单抗联合化疗组 200 例，安慰剂联合化疗组 100 例。结果  显示，特瑞普利单抗联合化疗对比安慰剂联合化疗显著延长 PD-    L1 阳性人群的 PFS，降低疾病进展或死亡风险 34.7%（HR=0.653； 95%CI：0.470，0.906），P=0.0102。此外，对于 PD-L1 阳性人群，

特瑞普利单抗联合化疗相较于安慰剂联合化疗的 OS  获益， HR=0.615（95%CI：0.414，0.914），P=0.0148。

四、产品受益风险判定

根据“YY/T 0316-2016  医疗器械风险管理”标准，对本产品 进行风险和受益分析。经综合评价，本产品的受益大于风险。

（一）受益评估

本试剂盒用于体外定性检测经 10%中性福尔马林固定、石 蜡包埋（FFPE）的三阴性乳腺癌组织中的程序性死亡受体-配体 1（Programmed Death-Ligand 1，PD-L1 ）蛋白表达情况，辅助鉴

别可使用特瑞普利单抗注射液（Toripalimab Injection，拓益® ) 治疗的三阴性乳腺癌患者，用作拓益® 的伴随诊断。

本产品临床应用的主要获益在于：三阴性乳腺癌是雌激素 受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体 2 表达缺乏的乳腺癌， 在我国约占所有乳腺癌的 19%-25%。 三阴性乳腺癌愈后较差， 复发风险较高。 特瑞普利单抗联合化疗是目前国内唯一获批的 用于 PD-L1 表达阳性（CPS≥1 ）的复发或转移性三阴性乳腺癌 一线治疗的免疫检查点抑制剂药物。本产品作为特瑞普利单抗 的伴随诊断试剂对用药人群进行筛选，可让三阴性乳腺癌患者 获得及时的治疗。

（二）风险评估

本产品检测的主要风险来自错误结果带来的风险。假阳性 结果可能会导致患者接受特瑞普利单抗的治疗没有显著的临床 获益， 同时可能出现与特瑞普利单抗治疗相关的不良反应。假 阴性结果可能会导致患者失去使用特瑞普利单抗治疗的机会， 无法获得潜在益处。

IHC  检测过程相对比较复杂，不规范的操作和解读可能带 来假阴性或假阳性结果。检测过程应严格按照说明书要求进行 操作，并进行充分和合理的质控，且任何检测结果均应结合临 床病史、形态学、 其他组织病理学诊断结果等进行综合分析。

该产品的风险管理计划已得到适当实施，所有的剩余风险 达到可以接受的程度，本产品上市带来的受益大于风险。

为保证用械安全，基于对主要剩余风险的规避，需要在说明 书中提示以下信息：

1.本试剂盒用于体外定性检测经 10%中性福尔马林固定、 石蜡包埋（FFPE）的三阴性乳腺癌组织中的程序性死亡受体-配 体 1（Programmed Death-Ligand 1，PD-L1 ）蛋白表达情况，辅 助鉴别可使用特瑞普利单抗注射液（Toripalimab Injection，拓益 ® )治疗的三阴性乳腺癌患者，用作拓益® 的伴随诊断。本产品仅 用于体外诊断，不做其他用途。对任何阳性或阴性结果的解读， 应由资深的病理医生结合病理形态学、临床表现及其他检测方 法进行评估，不作为单独的诊断指标。

2.警示及注意事项：产品说明书中介绍了该产品检验方法的 局限性及使用中的注意事项。

综合评价意见

本申报项目为境内第三类体外诊断试剂产品注册，属于进 入医疗器械优先审批程序的产品。依据《医疗器械监督管理条 例》（国务院令第739 号）、《体外诊断试剂注册与备案管理办法》 （国家市场监督管理总局令第 48 号）等相关医疗器械法规与配 套规章，经对申请人提交的注册申报资料进行系统评价， 申报 产品符合安全性、有效性的要求，符合现有认知水平，建议准予 注册。

2024 年 10 月 24  日

附件：产品说明书

PD-L1（JS311）抗体试剂（免疫组织化学法）说明书 【产品名称】

PD-L1（JS311）抗体试剂（免疫组织化学法）

【包装规格】

15 测试/盒、30 测试/盒、50 测试/盒。

【预期用途】

本试剂盒用于体外定性检测经 10%中性福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的三  阴性乳腺癌组织中的程序性死亡受体-配体 1（Programmed Death-Ligand  1 ，PD-L1） 蛋白表达情况，辅助鉴别可使用特瑞普利单抗注射液（Toripalimab Injection，拓益® )   治疗的三阴性乳腺癌患者，用作拓益® 的伴随诊断。

伴随诊断适应症

*特定临床环境下的用药治疗指导，请参阅拓益®产品说明书。

PD-1/PD-L1 信号通路是参与肿瘤免疫逃逸的重要途径，肿瘤细胞通过表达 PD- L1 与 T 细胞表面的 PD-1 结合，下调或抑制 T 细胞功能，导致肿瘤细胞免疫逃逸。 通过抗 PD-1 或抗 PD-L1 单抗对此种免疫检查点的阻断可以增强 T 细胞繁殖、生存、 杀伤活性而达到肿瘤免疫治疗效果。

乳腺癌（Breast Cancer，BC）是中国女性发病率第二高的癌症，居癌症相关死亡 原因的第五位，严重威胁女性健康。三阴性乳腺癌是雌激素受体（Estrogen Receptor ， ER）、孕激素受体（Progesterone Receptor ，PR）、人表皮生长因子受体-2（Human epidermal growth factor receptor -2 ，HER-2）表达缺乏的 BC，在我国约占所有乳腺癌

的 19%-25% 。TNBC 具有其独特的临床病理学特征，发病年龄较小，组织学分级较 高，肿瘤原发灶平均长径较大，淋巴结阳性率较高。TNBC 肿瘤侵袭性较强，常见软 组织及内脏转移，总体愈后较差，复发风险较高。

中国国家药品监督管理局（NMPA）已批准特瑞普利单抗注射液（Toripalimab Injection）上市，TORCHLIGHT 研究（NCT04085276）是一项多中心、随机、双盲、 安慰剂对照性 III 期研究，分别在 PD-L1 综合阳性评分 CPS≥1 阳性亚组人群和意向 治疗人群（ITT）中评估特瑞普利单抗注射液（JS001）联合注射用紫杉醇（白蛋白结 合型）与安慰剂联合注射用紫杉醇（白蛋白结合型）治疗首诊 IV 期或复发转移性三 阴性乳腺癌（TNBC）的疗效和安全性，试验表明在 PD-L1 综合阳性评分 CPS≥1 阳 性亚组人群中，与安慰剂联合注射用紫杉醇（白蛋白结合型）相比，特瑞普利单抗联 合注射用紫杉醇（白蛋白结合型）用于首诊 IV 期或复发转移性 TNBC 患者的治疗可 显著延长无进展生存期（PFS）。因此，肿瘤组织中 PD-L1 的表达情况，可能成为预 测 PD-1/PD-L1 抑制剂有效率的一个重要指标。通过检测 PD-L1 表达情况可指导特 瑞普利单抗注射液（Toripalimab Injection）的使用。

本品仅用于体外诊断，不做其它用途。对任何阳性或阴性结果的解读， 应由资深 的病理医生结合病理形态学、临床表现及其他检测方法进行评估，不作为单独的诊断 指标。

【检验原理】

本产品是利用抗原抗体特异性结合的原理检测 PD-L1 蛋白表达情况。产品中的 即用型 PD-L1 兔单抗作为一抗，在染色过程中特异性结合检测样本中的 PD-L1 蛋白， 并形成抗原-抗体复合物（抗原建议采用高 pH 值的 EDTA 抗原修复液进行高温热修 复），酶标记二抗与该复合物特异性结合，并通过酶促 DAB 显色试剂显色，使得检 测样本切片中相应抗原部位出现着色。封片后， 经光学显微镜观察，以此判断样本中 PD-L1 蛋白的表达情况。

【主要组成成分】

本试剂盒由即用型 PD-L1 兔单抗和同型对照试剂组成（见下表），即用型 PD-L1 兔单抗的主要成分是使用抗体稀释液稀释的兔抗人 PD-L1 单克隆抗体（抗体浓度约 0.6μg/mL），抗体类型是 IgG，克隆号是 JS311。同型对照试剂的主要成分是使用抗体 稀释液稀释的兔抗人 IgG 单克隆抗体（抗体浓度约0.6μg/mL），抗体类型是 IgG。

注意：不同批号试剂中各组成成分不可以互换使用。

本试剂盒不包含，需要自备的材料如下：

【储存条件及有效期】

2~8℃保存，有效期 12 个月。

开瓶稳定性：每次开瓶使用应不超过 6 小时，上机次数不超过 16 次，每次使用 后应立即密闭并置于 2~8℃保存，禁止冷冻，有效期为 12 个月。

机载稳定性：每次上机使用应不超过 6 小时，上机次数不超过 16 次，每次使用 后应立即密闭并置于 2~8℃保存，禁止冷冻，有效期为 12 个月。

生产日期及有效期见标签。

【适用仪器】

文塔纳医疗系统公司 Ventana Medical Systems, Inc. ，全自动免疫组化染色系统 BenchMark ULTRA Advanced Staining System，型号：BenchMark ULTRA，备案号： 国械备 20160026 号

【样本要求】

1、样本准备

建议使用经10%中性福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的组织样本。新鲜活检或 手术切除组织样本离体后应在30分钟内使用10%中性福尔马林固定，固定液量与所浸 泡组织的比例应足够。固定时间以6~72小时为宜。参照病理技术规范要求取材、脱 水、石蜡包埋并制成石蜡包埋组织样本。

石蜡包埋组织样本应切成厚度为3~5µm的切片。切片后，组织切片黏附在防脱载 玻片上，65±5℃烤片10~60分钟。

2、切片保存

为了防止蛋白丢失，保持抗原活性，一旦将组织黏附在载玻片上制成切片，切片 应置于2~8℃、室温（10~30℃)或-20±5℃避光保存。置于2~8℃保存的切片应在2个 月内使用；置于室温（10~30℃) 保存的切片应在14天内使用；置于-20±5℃保存的切 片应在6个月内使用。

应有H&E（苏木精-伊红染色法）染色结果作为对照。

【检验方法】

1、检测所需仪器、设备和耗材

文塔纳全自动免疫组化染色系统BenchMark ULTRA，试剂填充瓶及注册卡等。

2、染色程序

1）试剂准备

清洗液 EZ Prep Concentrate（10×)：使用蒸馏水或去离子水（试剂级水），按1： 10 比例稀释清洗液 EZ  Prep  Concentrate  (10×) ，配 制 足量 的清洗 液 EZ  Prep Concentrate（1×)供清洗步骤使用。

清洗液 Reaction Buffer Concentrate（10×)：使用蒸馏水或去离子水（试剂级水）， 按1： 10比例稀释清洗液 Reaction  Buffer Concentrate（10×), 配制足量的清洗液 Reaction Buffer Concentrate（1×)供清洗步骤使用。

2）设置染色程序

程序设置过程中，一抗试剂滴加方式分为仪器自动滴加或手工滴加。

仪器自动滴加：先注册试剂填充瓶及注册卡信息，再将本检测试剂灌注到瓶中备 用，程序中默认仪器自动滴加。

手工滴加：无需注册试剂填充瓶，设置程序中勾选“Antibody Titration”设置一抗 孵育时间，仪器运行至一抗孵育步骤时，每张切片手工滴加100uL一抗试剂。

上机染色程序设置如下：

3）样本准备

将待检样本切片和质控片置于65±5℃烘箱烤片10~60分钟，取出冷却至室温，10% 全脂牛奶浸泡10分钟，自来水冲洗2遍。选择上述染色程序， 打印标签，准备上机染  色。

4）封片

染色程序结束后取下切片，洗去油膜；经脱水、透明、封片后， 镜检观察。切片 于室温避光保存。

3、质量控制

每一例待检样本均应进行H&E（苏木精-伊红染色法）染色，用于判断样本的组 织形态和类型、保存质量和肿瘤细胞数量。每一轮样本检测均应同时设置阴、阳性质 控片（质控品）进行质控，用于判断试验的有效性。每一例待检样本均应用同型对照 抗体试剂在同一测试条件下进行染色，用于判断待检样本是否存在非特异性染色。

3.1.  阳性质控（实验室自备）

评估阳性质控片（已知PD-L1阳性）的PD-L1抗体染色以及同型对照抗体试剂的 染色，用于检测固定方法和抗原修复过程是否有效。PD-L1阳性的肿瘤组织、正常扁 桃体组织、正常胎盘组织或PD-L1阳性细胞系（如：ES-2、NCI-H596或NCI-H226等） 等样本均可作为本试剂的阳性质控片。

即用型PD-L1兔单抗在阳性质控品的肿瘤细胞、扁桃体生发中心的免疫细胞和隐

窝上皮细胞、胎盘滋养层细胞或ES-2、NCI-H596、NCI-H226细胞上应呈棕褐色细胞 膜和/或细胞质染色信号。阴性对照试剂在阳性质控品中应不见任何目标染色信号。 如果阳性质控片染色不符合要求，则试验样本的检测结果应视为无效。

3.2.  阴性质控（实验室自备）

评估阴性质控品（已知PD-L1阴性）的PD-L1抗体染色以及同型对照抗体试剂的 染色，以验证抗原抗体结合的特异性。PD-L1阴性的肿瘤组织、胃组织（腺上皮细胞） 或PD-L1阴性细胞系（如：K562或KM12等）等样本均可作为本试剂的阴性质控片。

即用型PD-L1兔单抗和同型对照试剂在阴性质控片中应不见目标染色信号。如果 阴性质控片染色不符合要求，则试验样本的检测结果应视为无效。

3.3.  同型对照试剂质控

同型对照试剂质控用于替代即用型PD-L1兔单抗试剂对待检样本进行同步染色， 用于判断待检样本是否存在非特异性染色，同型对照抗体试剂的染色结果应均为阴 性，无任何目标染色。如果同型对照抗体试剂染色结果为阳性或大量背景着色， 则试 验样本的检测结果应视为无效。

4、结果判读程序

病理医生应在光学显微镜下评估切片。建议先在 4 倍镜下对完整的样本进行初 步评估，随后在 10 倍和 20 倍镜下进行评分，最后在 40 倍镜下进行染色信号定位确 认。对于本试剂盒的详细判读指南，可参考试剂盒判读手册。

4.1.  评估样本H&E

首先应对待检样本进行H&E染色评估，用于判断待检样本组织形态和质量，待 检样本应不少于100个活肿瘤细胞，才能认为待检样本可以进行PD-L1表达情况的评 估。

4.2.  评估阳性质控片

评估阳性质控片的PD-L1抗体染色以及同型对照抗体试剂染色情况。阳性质控片 的判读结果应与预期一致。

4.3.  评估阴性质控片

评估阴性组织质控片的PD-L1抗体染色以及同型对照抗体试剂染色。阴性质控片

的判读结果应与预期一致。

4.4.  评估同型对照试剂染色的待检样本

评估PD-L1（JS311）抗体试剂（免疫组织化学法）内的同型对照抗体试剂染色的 待检样本，以判断染色的特异性，判读结果应不见目标染色信号。

4.5.  评估一抗试剂染色的待检样本

最后评估PD-L1（JS311）抗体试剂（免疫组织化学法）中的即用型PD-L1兔单抗 试剂染色的整张待检样本切片，判定待检样本中PD-L1的表达情况。

【阳性判断值】

计算PD-L1综合阳性评分（Combined Positive Score，CPS），即PD-L1阳性染色细 胞数（包括细胞膜染色的肿瘤细胞、细胞质和/或细胞膜染色的肿瘤相关免疫细胞） 占所有肿瘤相关区域中的所有肿瘤细胞和免疫细胞总数的比例乘以100，其中肿瘤相 关免疫细胞仅包括淋巴细胞，巨噬细胞，树突状细胞和粒细胞。

计算公式如下：

PD − L1 阳性染色细胞总数（肿瘤细胞，淋巴细胞，巨噬细胞，树突状细胞，粒细胞）

CPS =                                                                                                                                                                             × 100

肿瘤相关区域中的所有肿瘤细胞和免疫细胞的总细胞数

PD-L1在三阴性乳腺癌组织中的阴、阳性染色评分标准如下：

【检测结果的解释】

1 、 免疫组化染色结果建立在阴、阳性质控片（质控品）、同型对照抗体试剂检测符 合要求的基础上。根据染色情况对阳性染色结果进行评估。

2 、 出现假阴性的原因，可能是试剂失效或抗原修复、孵育时间、温度等染色程序错 误所致；亦或样本保存时间过长，抗原降解或变性所致。

3 、 出现假阳性的结果可能由于试剂与组织样本非特异性结合所致，如红细胞和细 胞色素C等也可造成非特异性染色。

4 、 利用本即用型PD-L1兔单抗进行免疫组织化学法检测三阴性乳腺癌组织样本，其 染色说明及参考图片如下：

【检测方法的局限性】

1 、 免疫组织化学法染色是一种需通过多个操作步骤完成的检测过程。试剂的选择 和组织的选择、取材、固定、处理、切片的制备和染色结果的解释需要进行专门 的培训。不恰当的上述步骤，都可能影响染色效果。

2 、 组织染色情况取决于染色前组织的操作和处理。不恰当的固定、冷冻、解冻、洗 涤、干燥、烤片、切片，或其它组织或液体的污染，都可能产生干扰或假阴性结 果等情况。

3 、 阴性结果表示未检出抗原，不一定表示样本中无该抗原存在。待测抗原编码基因 变异、抗原低表达或抗原修复不当等，都会造成抗原无法检出。

4 、 本试剂盒已针对文塔纳的全自动免疫组化染色系统BenchMark ULTRA及配套的 免疫显色试剂进行了优化，但用户使用该试剂盒前，须验证其使用效果。

5 、 本试剂盒提供的试剂和操作说明已经过优化。进一步稀释试剂或改变染色方案 等可能导致错误或不一致的结果。

6 、 不当的保存条件可能会造成组织中抗原降解而导致假阴性结果，请根据推荐的 组织切片保存条件进行储存，并在建议的时间内完成对切片的染色。

7 、 本试剂盒仅对10%中性福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的组织进行了验证，在 非10%中性福尔马林固定的组织上的使用情况，尚未经过确认。

【产品性能指标】

1、非临床评价指标 1.1.  免疫反应性

免疫反应性中考察了本试剂对30种正常人组织及26种非正常人组织的免疫反应 性。在检测的细胞类型或者组织类型中没有观察到超出预期的结果，对于正常组织/ 非正常组织中的PD-L1免疫组化表达，观察到的染色与文献报道一致。结果总结见下 表：

表 1 ：30 种正常人组织 PD-L1 免疫反应检测结果